實驗原理：

酪酰胺信號放大技術（Tyramide Signal Amplification, TSA）主要是利用酪胺的過氧化物酶反應。酪胺非活性熒光素底物在HRP和過氧化氫的作用下，會被激活產生活化熒光底物，同時形成共價鍵結合位點，共價結合在蛋白抗原表面或附近的酪氨酸殘基上，抗原和抗體的結合部位就會有大量的酪胺熒光素沉積，使抗原位點處的熒光信號增強。

酪胺熒光素底物-抗原酪氨酸共價穩定結合，故TSA信號不會受微波影響，可用熱修復法清除第一輪與抗原非共價結合的抗體復合物，并能在抗體去除后保留與抗原相關的熒光信號。然后，再用第二種一抗進行第二輪孵育，同時更換另一種酪胺熒光素底物，多次循環反復，不同的酪胺熒光素進行標記就可實現多重免疫組化染色。

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TSA原理示意圖

實驗方法：

實驗前準備：

1、PBS緩沖液、枸櫞酸鈉抗原修復液（或其他修復液）及3%?H₂O₂溶液；

2、用于IHC-P的多個靶標一抗；

3、mIHC試劑盒（多聚HRP二抗、TSA熒光素、TSA增強劑）

操作步驟：

石蠟切片脫蠟至水→抗原熱修復→阻斷內源性過氧化物酶→血清封閉→

第一個一抗孵育→對應HRP二抗孵育→添加TSA染色工作液1→微波加熱處理→

第二個一抗孵育→對應HRP二抗孵育→添加TSA染色工作液2→微波加熱處理→

第三個一抗孵育→對應HRP二抗孵育→添加TSA染色工作液3→微波加熱處理→

……

以此循環N次→細胞核復染DAPI→封片及檢測

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多重免疫組化原理示意圖

TSA技術優勢：

1.?提高信號放大倍數，顯著擴增抗原相關熒光信號；

2.?可檢測低蛋白豐度的靶標，提高實驗體系靈敏度；

3.?可微波去除一抗/二抗及非特異性染色；

4.?降低一抗使用量，節約一抗成本；

5.?針對每張組織切片可收集到更多的數據，實現一張切片多達6種靶標的共表達；

6.?適合任何經IHC-P驗證的抗體，同一樣本中的靶標都可以選用高特異性的正能生物病理級抗體；

7.?可在同一樣本中使用同一種屬來源的多種一抗進行多標記識別，例如都選用兔單克隆抗體，避免了交叉干擾，同時解決了一抗二抗種屬匹配限制問題。

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產品信息：

我司開發的多重免疫組化試劑盒，具體TSA熒光染料參考如下：TSA-480，TSA-520，TSA-570，TSA-620，TSA-670，TSA-690，TSA-780。

試劑盒中的熒光染料可單獨或配合使用，可以實現雙標、三標以及更多重熒光放大/多重同源抗體熒光標記等功能，極大滿足了淋巴細胞檢測、腫瘤微環境等各領域實驗需求。

• 產品貨號：18002

• 產品名稱：Goat Anti-Mouse/Rabbit Multiplex IHC Detection Kit (Double)

• 產品規格：50T/100T

• 結果展示：Immunohistochemistry analysis of paraffin-embedded chimera mouse carcinoma using F4/80 (Green) and CD206 (Red) antibodies.