脫脂奶粉含有牛奶中的多種蛋白質，如乳清蛋白和酪蛋白，是最常見的封閉劑之一。脫脂奶粉價格低廉、易制備，但需要在使用前應進行過濾以防止微粒與膜結合造成“斑點”背景。

由于牛奶中含有磷酸化的酪蛋白，可被抗磷酸化酪氨酸的抗體識別，導致抗體的非特異性結合進而形成高背景結果，因此在檢測磷酸化蛋白時，不建議使用脫脂奶粉。此外使用含有生物素（Biotin）的檢測體系時，也不能使用牛奶，因為牛奶也中存在Biotin。

常規實驗操作是用5% NFDM進行封閉，但當待測蛋白的豐度較低時，高濃度的牛奶會封閉某些抗原表位，讓本就微弱的結果消失殆盡。因此，我們建議此時從較低濃度的脫脂奶粉封閉液開始進行封閉條件摸索（如1% m/v）。

BSA來源于奶牛血清，與牛奶類似，是一種很好的通用封閉劑且易于在實驗室中制備。與含牛奶的緩沖液類似，BSA溶液在使用前應進行過濾以去除顆粒，防止“斑點”背景產生。

在檢測磷酸化蛋白時，BSA 通常優于牛奶，且用其稀釋配制的抗體工作液不易變性，可以重復使用。BSA 的工作濃度通常為 0.3-5%，其中以3%的濃度最為常見。

血清（Serum）

血清通常來源于馬或胎牛，價格比牛奶和BSA更高，不常用作封閉劑。全血清含有多種蛋白質，免疫組化實驗中作為封閉劑使用的血清濃度一般為10%?m/v。

全血清含有免疫球蛋白，可能與一抗或二抗發生交叉反應導致非特異性背景。但在與樣本物種差異比較大的情況下，血清作為封閉劑的效果仍然較為優秀。

魚膠（Fish Gelatin）

魚膠蛋白更常用于免疫組織化學，在WB實驗中，2%魚膠蛋白可用作封閉劑。魚膠相比BSA和牛奶，不會與哺乳動物蛋白質發生交叉反應。由于魚膠含有內源性生物素，它不能與Biotin檢測系統一起使用。

正能生物快速封閉試劑的優點

1. 魚膠蛋白為小分子多肽，相比于大分子蛋白，與轉印膜結合效果效果好、封閉效率更高，可有效降低因封閉不足導致的高背景；

2. 提高信噪比，增強抗體信號，為抗原-抗體結合提供了絕佳的反應環境，能節約抗體使用；

3. 預混TBST，加入蒸餾水2分鐘速溶，可在15分鐘左右快速完成封閉操作并能保證與常規封閉劑相同的效果，大幅縮短封閉時間。